Das Große Zweiblatt wird durch Wespen und andere Insekten bestäubt. Die Stängel dieser Art sind drüsig behaart um kletternden Käfern den Aufstieg zu erleichtern. Nach der Bestäubung entwickeln sich die Samen die durch den Wind fortgetragen werden (Windstreuer). Neben der Verbreitung durch die Samen findet auch eine vegetative Vermehrung über das Wurzelgeflecht statt.